Демкович А.Е.   Коршиков И.И.   Политов Д.В.   Мудрик Е.А.  

Изменчивость двух микросателлитных локусов плюсовых деревьев сосны обыкновенной юго-востока Украины

Докладчик: Демкович А.Е.

Накоплен большой объем данных по генетической изменчивости популяций сосны обыкновенной Pinus sylvestris L. как в Украине, так и в мире. Однако в отличие от достаточно обширной информации, полученной с помощью аллозимных маркеров, использование ДНК маркеров в таких исследованиях, и особенно селекционно-направленных, в украинской части ареала только начинается. Практически неизучены деревья плюсовой селекции. Оценка генетических параметров лесосеменных плантаций сравнительно с природными популяциями, контроль генетических особенностей их семенного потомства, системы скрещивания могут быть успешно реализованы с использованием ДНК маркеров, особенно высокоизменчивых микросателлитных локусов ядерной локализации. Мы изучили полиморфизм двух ядерных микросателлитных локусов Spac 11.8 и Pttx2146 у 26 плюсовых деревьев P. sylvestris из клоновой семенной плантации заложенной УкрНИИЛХА им. Высоцкого. Выделение ДНК осуществляли из почек и эндоспермов семян коммерческими наборами с сорбентом («Diatom DNA prep», Изоген). Для сорбции фенольных соединений добавляли поливинилпирролидон «К-90». Амплификацию проводили с использованием коммерческого набора («GenePak PCR Core», Изоген). Разделение продуктов амплификации осуществляли в вертикальном 6% неденатурирующем полиакриламидном геле с последующим окрашиванием нитратом серебра.
У 26 растений P. sylvestris для праймеров Pttx2146 было визуализировано четыре локуса. Аллели хорошо интерпретируемого и высокополиморфного локуса Pttx2146-1 имели размер 168–240 п.н. Этот локус соответствует локусу Pttx2146 Pinus taeda L. (Elsik et. al. 2000) и локусу Pttx2146.1, описанному у P. sylvestris (Белоконь и др. 2008). Размер амплифицирующихся последовательностей у P. taeda составлял 162 192 п.н. Нами была обнаружена также ранее не описанная группа ампликонов размером около 600 п.н. (локус Pttx2146-0). Низковариабельный, предположительно с тремя аллелями локус Pttx2146-2 (соответствует Pttx2146.2, Белоконь с соавт. 2008) имел ампликоны около 130 п.н. и один, по всей видимости мономорфный локус Pttx2146-3 (соответствует Pttx2146.3, Белоконь с соавт. 2008) около 100 п.н. Для дальнейшего анализа использовался лишь локус Pttx2146 1 – единственный, обнаруженный у P. taeda и подробно описанный у P. sylvestris. По локусу Pttx2146 1обнаружено 12 аллелей, из них 8 с частотой менее 0.05 и 3 аллеля с частотой более 0,1. Из 19 генотипов локуса Pttx2146-1 лишь 6 встречались более чем в 5% случаев. Локус характеризуется некоторым избытком гетерозиготных генотипов. Микросателлитный локус Spac 11.8 ранее использовался Vornam с соавт. для выявления мутационных событий у растений P. sylvestris в зоне ЧАЭС, при этом обнаружено 7 аллелей от 128 до 161 п.н. В нашем случае было амплифицировано 11 аллелей с длиной ампликонов в диапазоне от 124 до 156 п.н. Как и в случае с локусом Pttx2146, лишь 3 аллеля локуса Spac 11.8 встречались с частотой более 0,1. Частота встречаемости 5 из 11 обнаруженных аллелей была менее 0,05. По локусу Spac 11.8 было обнаружено 29 генотипов, что на треть больше, чем по локусу Pttx2146-1, а генетическое разнообразие Нея (HE) составило 0.741. Этот локус характеризовался избытком гомозиготных генотипов.
Таким образом, два исследуемых микросателлитных локуса в значительной степени отличаются по характеру изменчивости. Следовательно, в анализе генетического полиморфизма с применением микросателлитных локусов необходимо предварительно изучить характер их изменчивости и в дальнейшем использовать стандартизированную выборку таких локусов.
 

Файл тезисов: Демкович_и_др.doc


К списку докладов